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原位核酸分子雜交組織(或細(xì)胞)化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交,其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段在適宜的條件下通過氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA雙鏈分子的特點(diǎn),把帶有標(biāo)記的(有放射性核素,如3H、35S、32P及熒光素、生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位。
做核酸雜交時(shí)首先要進(jìn)行預(yù)雜交,即用非特異的核酸溶液封閉膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn),核酸交液主要由去離子甲酰胺、SSC、變性鮭魚精DNA等組成,預(yù)雜交和雜交都使用相同緩沖液,不同的僅僅是預(yù)雜交液中不含有探針。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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