服務(wù)介紹：

BCA法測蛋白的原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nm處有最大的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。BCA 法與傳統(tǒng)方法相比，操作更簡單、試劑及其形成的顏色復(fù)合物更穩(wěn)定、靈敏度更高。BCA法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，對于5%以內(nèi)的去垢劑如SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性，但易受螯合劑、還原劑等的影響，在測定蛋白濃度前應(yīng)盡量使樣本滿足如下要求：EDTA濃度≤10mM、DTT濃度≤1mM、2-ME≤0.01%、無EGTA。

實驗流程：

1、 配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2、 取適量的20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至終濃度為500μg/ml。

3、 配制BCA工作液。

4、 將500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加稀釋液補(bǔ)足至20μl，其蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度依次為0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。

5、 加20μl待測蛋白到96孔板或EP管中，如果樣本不足20μl，用稀釋液補(bǔ)足至20μl。

6、 向各孔或EP管加入200μl配制好的BCA工作液，迅速混勻，37℃孵育30～60min。

7、 冷卻至室溫，立即用酶標(biāo)儀或分光光度計測定562nm波長處吸光度，各孔或EP管吸光度減去蛋白濃度為0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度，以求得的差值為縱坐標(biāo)： 以標(biāo)準(zhǔn)孔或EP管中蛋白濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品的蛋白濃度。

實驗結(jié)果：全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！